用于快速抗體和 His 標(biāo)簽蛋白純化的親和層析解決方案
親和層析 （AC） 是生命科學(xué)實(shí)驗(yàn)室和生物制藥行業(yè)純化生物制劑的關(guān)鍵步驟。它特別適用于基于與親和配體的特異性相互作用，單步減少抗體和 his 標(biāo)簽蛋白樣品中的主要污染物。
對(duì)于篩選、制備純化和其他研究應(yīng)用，Sartobind?? IDA 和我們的下一代Rapid A 膜層析濾器以即用型針頭式過濾器形式提供，可減少工作流程步驟，更大限度地縮短設(shè)置時(shí)間，并確保簡(jiǎn)單、靈活和高選擇性的純化。
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立即聯(lián)系層析專家親和層析及其應(yīng)用
親和層析的原理
當(dāng)細(xì)胞培養(yǎng)上清液等復(fù)雜混合物通過 Sartobind? Lab 膜層析濾器中的親和層析膜時(shí)，對(duì)流分子傳輸可有效捕獲目標(biāo)分子 （MOI），同時(shí)宿主細(xì)胞蛋白 （HCP） 和 DNA 等雜質(zhì)流過膜。在洗脫 MOI 之前，可以使用洗滌步驟來提高純度。
上樣前需要濃縮或緩沖液置換樣品？
抗體純化
Protein A 是一種來源于金黃色葡萄球菌的細(xì)菌細(xì)胞壁蛋白。它對(duì)免疫球蛋白 G 抗體（包括 mAb）的 Fc 區(qū)具有高親和力。
當(dāng)固定在層析基質(zhì)上時(shí)，Protein A 能夠從復(fù)雜混合物（如細(xì)胞培養(yǎng)上清液或血清樣品）中選擇性捕獲抗體。該方法提供高純度抗體樣品，可用于從免疫測(cè)定到治療性抗體生產(chǎn)的各種應(yīng)用。
His 標(biāo)簽蛋白純化
二價(jià)金屬離子對(duì)組氨酸殘基具有特別高的親和力。在研究實(shí)驗(yàn)室中，重組蛋白通常在 N 端或 C 端帶有多聚組氨酸標(biāo)簽，便于通過固定化金屬親和層析 （IMAC） 選擇性捕獲它們。
由于其重現(xiàn)性、選擇性和溫和的洗脫條件，該方法可以將純化簡(jiǎn)化為單步工藝，生產(chǎn)純天然蛋白質(zhì)樣品，為結(jié)構(gòu)和功能研究做好準(zhǔn)備。
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常見問題解答
親和層析基于生物分子與所選配體的特異性相互作用。它可用于抗體和其他含 Fc 的分子 （蛋白 A） 或用 his 標(biāo)簽 （IDA） 改造的蛋白質(zhì)的捕獲純化。
Sartobind?? IDA Lab 也可用于從環(huán)境樣品中捕獲或去除二價(jià)金屬離子。
Sartobind? Lab 目前提供蛋白 A 或亞氨基二乙酸 （IDA） 配體。
親和層析基于生物分子與所選配體的特異性相互作用。它可用于抗體 （Protein A） 或用 his 標(biāo)簽 （IDA） 改造的蛋白質(zhì)的捕獲純化。
Sartobind? IDA Lab 也可用于從環(huán)境樣品中捕獲或去除二價(jià)金屬離子。
一個(gè)或四個(gè)單元、一對(duì)魯爾到 UNF 適配器和一個(gè)快速入門指南。
兩個(gè)裝置、一對(duì)魯爾到 UNF 適配器和一個(gè)快速入門指南。
是的。雖然我們已采取措施，通過在產(chǎn)品包裝中提供快速入門指南來更大限度地減少對(duì)環(huán)境的影響，但如果您需要有關(guān)如何使用我們產(chǎn)品的更多信息，可以從我們 eShop 的相關(guān)產(chǎn)品頁面下載完整的說明手冊(cè)。
兩種膜層析裝置均可在有或沒有設(shè)備的情況下使用。注射 泵或蠕動(dòng)泵 可直接連接到魯爾鎖入口，以更短的設(shè)置時(shí)間實(shí)現(xiàn)快速純化?；蛘撸ㄒ粚?duì)適配器，以便與大多數(shù)液相色譜系統(tǒng)兼容。
柱床體積也稱為膜體積 （MV）。
- Sartobind? Rapid A 實(shí)驗(yàn)室：0.5 mL
- Sartobind? IDA 實(shí)驗(yàn)室：2.1 mL
這些層析單元在大多數(shù)常見的純化緩沖液中是穩(wěn)定的。應(yīng)避免使用氧化劑。
與填料色譜法不同，氣泡不會(huì)破壞 Sartobind? 膜。這樣就無需對(duì)緩沖液進(jìn)行脫氣，節(jié)省了大量的制備時(shí)間。
為了獲得更優(yōu)的生物分子捕獲效果，我們建議使用與待純化樣品成分相似的緩沖液進(jìn)行平衡。這是一個(gè)快速的過程，只需幾秒鐘的純化周期。
盡管 Sartobind? 膜具有抗堵塞性，但我們建議在上樣前對(duì)所有樣品進(jìn)行預(yù)過濾。為了更大限度地提高分析效率，可以將 Minisart? 針頭式過濾器 連接到 Sartobind? Lab入口，以便同時(shí)進(jìn)行預(yù)過濾和樣品加載。
如果分子的最佳捕獲條件未知，我們建議在膜上加載不同的金屬離子進(jìn)行篩選。建議的金屬離子包括鎳 （Ni2+）、鈷 （Co2+）、銅 （Cu2+） 和鋅 （Zn2+）。
也可以進(jìn)行偵查純化以確定最佳洗滌和洗脫條件。當(dāng)通過離心機(jī)、注射器或泵進(jìn)行純化時(shí)，使用逐漸增加咪唑濃度的緩沖液進(jìn)行多步洗脫。如果使用液相色譜系統(tǒng)，則應(yīng)用線性洗脫梯度。然后，應(yīng)使用適當(dāng)?shù)姆椒ǎɡ?SDS PAGE）來分析流出液和洗脫液餾分，并確定哪些條件可提供所需的純度水平。
每個(gè) Sartobind? Lab 膜層析濾器都可以在適當(dāng)?shù)脑偕蛢?chǔ)存下多次重復(fù)使用。為了保持 Sartobind? IDA Lab 單元的結(jié)合載量，建議定期剝離和重新加載螯合金屬離子。
我們建議對(duì)每個(gè)目標(biāo)生物分子使用單獨(dú)的 Sartobind? Lab 膜層析濾器，以消除殘留風(fēng)險(xiǎn)。
Sartobind? Rapid A Lab 已經(jīng)具有每個(gè)循環(huán) ≥17.5 mg 的高動(dòng)態(tài)結(jié)合載量。
為了純化更多的樣品，可以串聯(lián)運(yùn)行兩個(gè)單元。或者，您可以通過單個(gè)膜層析濾器充分利用高流速，在多個(gè)循環(huán)中用多個(gè)較小的負(fù)載純化一個(gè)樣品。
是的，有。Sartobind? Rapid A Lab 不僅與所有其他 Sartobind? Lab 膜層析濾器一樣，使用 100% 可再生能源制造，而且能夠重復(fù)使用多達(dá) 100 次循環(huán)，有可能減少您需要的耗材數(shù)量，從而減少研究浪費(fèi)。此外，與其他Protein A 填料層析柱和膜層析濾器不同，Sartobind? Rapid A Lab 可以在室溫下儲(chǔ)存，從而減少了對(duì)能源密集型冷卻的需求。
