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稀有單細(xì)胞的分離和染色

守護(hù)您的稀有細(xì)胞:無(wú)論分離或染色,確保無(wú)細(xì)胞丟失

SIEVEWELL 納米孔芯片引領(lǐng)基于納米孔的單細(xì)胞分離進(jìn)入新時(shí)代。SIEVEWELL 是一款全新設(shè)計(jì)的腔室載玻片,其液體腔室底部有額外的納米孔結(jié)構(gòu)。這些納米孔每個(gè)孔的底部都有 2 個(gè)微孔,與下面的一個(gè)小液體微腔相連。這樣可以捕捉納米孔內(nèi)的細(xì)胞,并從液室頂部產(chǎn)生單向流動(dòng),通過(guò)孔隙進(jìn)入下方的液體微腔。得益于這一設(shè)計(jì),用戶(hù)不僅可以在納米孔中分隔并捕獲單細(xì)胞,還可以在孔內(nèi)直接對(duì)這些細(xì)胞進(jìn)行處理,例如抗體標(biāo)記、單細(xì)胞染色、清洗等,無(wú)懼丟失任何細(xì)胞。這種完全無(wú)細(xì)胞損失的芯片上處理方式使SIEVEWELL 技術(shù)成為稀有單細(xì)胞應(yīng)用的高效之選,可用于分離循環(huán)腫瘤細(xì)胞、胎兒細(xì)胞等。

通過(guò)將這種獨(dú)特的芯片設(shè)計(jì)與 CellCelector相結(jié)合,可以實(shí)現(xiàn)全自動(dòng)化的單細(xì)胞鑒定,并可100%分離出所需的靶細(xì)胞。

SIEVEWELL:技術(shù)細(xì)節(jié)和特征

設(shè)計(jì)

  • 標(biāo)準(zhǔn)顯微鏡載玻片規(guī)格
  • 良好的生物相容性,非細(xì)胞毒性材料
  • 帶納米孔的薄膜
  • 超低吸附表面
  • 納米孔尺寸:20 μm 寬 x 25 μm 深。非常適合高效的單細(xì)胞捕獲。
  • 每個(gè)芯片具有37萬(wàn)個(gè)納米孔(17 x 17毫米)

  • 六邊形設(shè)計(jì)的納米孔是自動(dòng)化細(xì)胞檢測(cè)和細(xì)胞計(jì)數(shù)的理想選擇
  • 每個(gè)納米孔底部有兩個(gè)直徑為 2 μm 的微孔,易于通過(guò)液體,同時(shí)有效地保留細(xì)胞

SIEVEWELL 薄膜結(jié)構(gòu)。納米孔的俯視圖。

SIEVEWELL 薄膜結(jié)構(gòu)。納米孔的側(cè)視圖。

SIEVEWELL 的明場(chǎng)圖像。納米孔底部的孔隙清晰可見(jiàn)。

SIEVEWELL 納米孔芯片的光學(xué)性質(zhì)

  • 在顯微鏡明場(chǎng)下呈現(xiàn)高透明度
  • 自發(fā)熒光信號(hào)極低

得益于這些優(yōu)勢(shì),SIEVEWELL 技術(shù)非常適合于顯微鏡和光學(xué)測(cè)量,并且可以采集高質(zhì)量的顯微成像數(shù)據(jù)。

SIEVEWELL:工作原理

SIEVEWELL 芯片共有 37 萬(wàn)個(gè)納米孔,其中每個(gè)孔的底部有兩個(gè)直徑為 2 μm 的微孔。它們連接芯片上方和下方的流體部分。納米孔下方的流體通過(guò)位于芯片膜下方的一個(gè)液體微腔連接到兩側(cè)端口。

將細(xì)胞懸液接種到芯片上后,可以通過(guò)用標(biāo)準(zhǔn)的微量移液器抽吸液體來(lái)產(chǎn)生和控制從內(nèi)部液室到側(cè)端口的單向流體流。這些細(xì)胞將跟隨液體流動(dòng)并被滯留在納米孔中。當(dāng)一個(gè)細(xì)胞進(jìn)入納米孔時(shí),它會(huì)堵塞微孔,從而減少通過(guò)納米孔的液體流量。因此,其他細(xì)胞將自動(dòng)重定向到其他空的納米孔,從而實(shí)現(xiàn)自隔離納米孔陣列。細(xì)胞裝載完成后,可以使用相同的方式對(duì)芯片進(jìn)行染色,確保在固定、破膜、封閉、孵育和洗滌過(guò)程中不會(huì)造成任何的細(xì)胞損失。

SIEVEWELL 無(wú)損單細(xì)胞分離的芯片染色工作流程

1.?填裝細(xì)胞

將富集或處理過(guò)的單細(xì)胞懸液接種到芯片中。SIEVEWELL 技術(shù)可兼容活細(xì)胞和固定細(xì)胞。

第 1 步

將單細(xì)胞懸液加入 SIEVEWELL 芯片的腔室中。

第 2 步

從 SIEVEWELL 芯片的側(cè)端口吸出緩沖液。

使用移液器進(jìn)行抽吸,產(chǎn)生從內(nèi)部腔室流出的定向液流,并通過(guò)納米孔底部的兩個(gè)微孔,流向側(cè)端口的移液器。

細(xì)胞隨著液流向下移動(dòng),由于微孔足夠小,可以避免細(xì)胞通過(guò),因此細(xì)胞將在納米孔內(nèi)被捕獲。

由于納米孔的大小限制,每孔只能捕獲一個(gè)細(xì)胞。細(xì)胞在進(jìn)入納米孔后堵塞微孔,減少了液流通過(guò)。因此,后續(xù)的細(xì)胞將自動(dòng)重定向到周?chē)?、空的納米孔中,從而實(shí)現(xiàn)非常高效的自分選單細(xì)胞捕獲。

接種至 SIEVEWELL 的 A549 細(xì)胞

2. 細(xì)胞染色和清洗

加入試劑、孵育、洗滌,細(xì)胞染色不丟失。在染色前也可以在裝置內(nèi)先進(jìn)行固定。

第 1 步

將試劑或清洗液加入 SIEVEWELL 芯片的腔室中。

使用 CellCelector 進(jìn)行掃描

藍(lán)色:DAPI;綠色:A549 細(xì)胞;紅色:Namalwa 細(xì)胞

納米孔中捕獲的 CTC

第 2 步

從 SIEVEWELL 芯片的側(cè)端口吸出過(guò)量的試劑或洗滌緩沖液。細(xì)胞被納米孔捕獲,在整個(gè)流程中不會(huì)丟失。

洗滌后的熒光圖像。

3. 檢測(cè)

使用 CellCelector 掃描芯片以檢測(cè)靶細(xì)胞。細(xì)胞固定在納米孔中,并在掃描過(guò)程中保持其原始位置。

由于 SIEVEWELL 芯片高度平整,因此用戶(hù)可以在不失焦的同時(shí)輕松地掃描芯片的整個(gè)區(qū)域。

用 CellCelector 進(jìn)行掃描

藍(lán)色:DAPI;綠色:A549 細(xì)胞;紅色:Namalwa 細(xì)胞

納米孔中捕獲的 CTC

4. 靶細(xì)胞回收

將靶細(xì)胞轉(zhuǎn)移至 PCR 管或細(xì)胞培養(yǎng)板中。SIEVEWELL 納米孔芯片經(jīng)過(guò)專(zhuān)門(mén)優(yōu)化,可與全自動(dòng)無(wú)損細(xì)胞分離系統(tǒng) CellCelector 配合使用。

使用 CellCelector 回收單細(xì)胞

分離至目的孔中的 A549 細(xì)胞

5. 下游分析

SIEVEWELL 技術(shù)兼容單細(xì)胞 DNA 二代測(cè)序、RNA 測(cè)序等分子生物學(xué)分析方法。回收后的活細(xì)胞可克隆。

使用 GAPDH 的基因特異性引物進(jìn)行單細(xì)胞 RT-PCR。

PC:陽(yáng)性對(duì)照,收集 A549 細(xì)胞的 c-DNA

NC:陰性對(duì)照,裂解緩沖液

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