精確數(shù)量細胞的分離

獲取精確數(shù)量細胞以進行驗證實驗

在許多應用中，如測量富集率或評估靈敏度和特異性，需要使用精確數(shù)量的細胞以保證高質(zhì)量插入作為參考樣品。傳統(tǒng)的細胞分選技術(shù)如 FACS 或單細胞打印不能保證將如此精確數(shù)量的細胞沉積到目標孔/管中。

CellCelector平臺結(jié)合我們的納米孔板技術(shù)，進行細胞數(shù)量計算，精確和溫和地分離出精確數(shù)量的細胞，精確獲取 1、5、10、50或100個完整細胞。例如，如果您的分析需要精確的 1、5、10、50 或 100 個細胞，您可以使用 CellCelector 精確獲取 1、5、10、50 或 100 個完整細胞。

圖 1.CellCelector支持分離轉(zhuǎn)移細胞到任何標準或定制孔板、管或小瓶中。

通過 CellCelector 平臺分離精確數(shù)量細胞包括以下幾個步驟：(i) 在 CellCelector S200 ULA 納米孔板?中接種細胞，細胞密度與每個納米孔的目標細胞數(shù)相對應；(ii) 對納米孔中的細胞進行自動掃描并計數(shù)；(iii) 自動選擇填充目標細胞數(shù)量的納米孔；(iv) 操作人員驗證列表；(v) 自動將選定的細胞組轉(zhuǎn)移到目標管/孔中，并完整跟蹤整個過程（圖 2）。

圖 2. CellCelector 自動分離精確數(shù)量細胞的工作流程。

當將單細胞懸液接種到納米孔板中時，平臺將隨機捕獲納米孔中的細胞。理想情況下，單細胞懸浮液均勻播種會遵循標準泊松分布。我們在此處通過一個方程式來描述隨機捕獲納米孔中給定數(shù)量細胞 (k) 的概率 (p)，其中 λ 是每個納米孔的平均接種細胞數(shù)量。圖 3 顯示了幾種細胞接種密度下 S200 24 孔納米孔板的單個孔中的理論和實測細胞分布?？梢酝ㄟ^此方法計算接種到 24 孔板每個孔中所需的細胞數(shù)量，以便最大限度地提高在納米孔內(nèi)捕獲所需數(shù)量細胞的概率。

圖 3.?接種細胞密度為 1、5、10 和 20 個細胞/納米孔時的理論（線）和實驗（點）泊松分布。共計掃描和分析納米孔 2,500 個。

如果細胞被熒光標記，則可以在BF和任何熒光通道（圖3和圖4）中掃描種子孔。BF 和熒光模式下都可以進行細胞計數(shù)。細胞計數(shù)后，用戶可以在納米孔圖像庫中查看所有納米孔的圖像。

圖 4.?在 FITC 通道中掃描的一個孔的概覽圖像。其中圓圈內(nèi)的是掃描和分析區(qū)域。

圖 5.?200 μm 納米孔中的典型細胞分布，平均細胞密度為 20 個染色 SK-BR-3 細胞/納米孔。

左圖：明場，右圖：FITC。

圖 6.?使用 CellCelector 軟件自動選擇的具有 5 個細胞的 12 個納米孔示例。

一旦操作人員驗證了要回收的納米孔列表，系統(tǒng)就會自動對所有選中的納米孔進行挑取。在挑取過程中，系統(tǒng)會在挑取前后自動保存圖像，以便進行質(zhì)量控制。該系統(tǒng)還可以將幾個納米孔的內(nèi)容物匯集到一個目標管中，從而使更多細胞沉積，例如 20 個細胞 = 2 個納米孔x 10 個細胞，100 個細胞 = 5 個納米孔x 20 個細胞。

圖 7.?挑取一組 20 個細胞的示例。自動保存挑取前后的圖像。