成像設(shè)備千千萬(wàn)萬(wàn)，賽多利斯 Incucyte^? 實(shí)時(shí)活細(xì)胞成像系統(tǒng)因其可被放入培養(yǎng)箱中實(shí)現(xiàn)無(wú)人值守拍攝以及“傻瓜式”操作等特點(diǎn)，成為成像設(shè)備中的佼佼者，被廣泛應(yīng)用于藥物開(kāi)發(fā)和基礎(chǔ)研究中。Incucyte^? 實(shí)時(shí)抓拍分析功能可在體外細(xì)胞水平藥物評(píng)價(jià)中獲得更準(zhǔn)確的結(jié)果，不僅克服了MTT等終點(diǎn)法帶來(lái)的誤差和繁瑣操作，還能通過(guò)配套試劑或工具實(shí)現(xiàn)更多功能，如：內(nèi)吞、劃痕以及趨化等。

Incucyte^?活細(xì)胞成像系統(tǒng) 在臨床前藥物研究中擁有非常多的應(yīng)用案例，并且其中很多已經(jīng)到了臨床實(shí)驗(yàn)階段。這些案例涵蓋了多種應(yīng)用種類(lèi)，今天，陳老濕就通過(guò)幾個(gè)典型案例，為大家一一分析解讀：

ADC藥物研究

案例1

SAR408701（Tusamitamab Ravtansine）是賽諾菲研發(fā)的“First-in-Class”靶向CEACAM5的ADC藥物，目前正處于III期臨床（NCT04154956），以進(jìn)一步確認(rèn)該標(biāo)志物在非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）患者中的療效。ADC的細(xì)胞內(nèi)化是其靶向能力的主要表征，在2020年賽諾菲的一篇關(guān)于該藥的臨床前研究文章中，就使用了Incucyte^? 檢測(cè)SAR408701的內(nèi)化能力^[1]。

圖1. Incucyte^? 內(nèi)化測(cè)試數(shù)據(jù)：pH依賴(lài)性染料和ADC藥物的偶聯(lián)比例為4.8，工作濃度10μg/mL，每隔一個(gè)小時(shí)拍攝一次，共30小時(shí)；計(jì)算紅色熒光面積/相差面積

案例2

BYON3521是Byondis公司開(kāi)發(fā)的ADC藥物，由靶向c-MET的人源化IgG1單克隆抗體SYD2884和被稱(chēng)為vc-seco-DUBA的可切割連接子藥物組成，目前處于I期臨床階段（NCT05323045）。該公司發(fā)布的藥物臨床前研究結(jié)果中，Incucyte^? 被用于檢測(cè)該藥物的內(nèi)化能力和Bystander Activity（旁觀者效應(yīng)，即在MET陽(yáng)性癌細(xì)胞存在情況下，對(duì)MET陰性癌細(xì)胞的殺傷能力）^[2]。

圖2. Incucyte^? 內(nèi)化測(cè)試數(shù)據(jù)：賽多利斯內(nèi)化試劑和ADC藥物的偶聯(lián)比例為3，工作濃度10μg/mL，每隔半個(gè)小時(shí)拍攝一次，拍攝時(shí)間24小時(shí)；計(jì)算紅色熒光面積/相差面積

圖3. 旁觀者效應(yīng)：Incucyte^? 觀察6天，在MET陽(yáng)性比例只有20%的時(shí)候，BYON3521就可以對(duì)MET陰性細(xì)胞（帶紅色熒光）進(jìn)行殺傷

案例3

MGC018是MacroGenics一款靶向B7-H3的ADC藥物，能夠?qū)⑿》肿铀幬锒趴顾兀╠uocarmycin）遞送到表達(dá)B7-H3的癌細(xì)胞中，杜卡霉素能夠破壞分裂細(xì)胞和非分裂癌細(xì)胞的DNA，從而導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。針對(duì)前列腺癌I期臨床結(jié)果，它顯示出了初步的抗腫瘤活性。在MacroGenics發(fā)布的該藥物的臨床前研究中，Incucyte^? 被用來(lái)檢測(cè)旁觀者效應(yīng)^[3]。

圖4. Incucyte^? 長(zhǎng)時(shí)程實(shí)時(shí)活細(xì)胞成像發(fā)現(xiàn)，MGC018對(duì)單培養(yǎng)的B7-H3陰性細(xì)胞沒(méi)有作用，但即使有極少量的B7-H3陽(yáng)性細(xì)胞存在，也會(huì)對(duì)陰性細(xì)胞產(chǎn)生顯著的旁觀者殺傷

雙特異性抗體

案例1

CYT-303是一種雙特異性抗體，它通過(guò)NKp46/CD16接合NK細(xì)胞，并靶向腫瘤細(xì)胞上表達(dá)的GPC3，用于募集NK細(xì)胞治療肝細(xì)胞癌（HCC）。從該公司發(fā)布的臨床前數(shù)據(jù)，Incucyte^? 被用來(lái)測(cè)試該抗體存在下，NK細(xì)胞對(duì)腫瘤球的殺傷和腫瘤細(xì)胞的多輪殺傷^[4]。

圖5. Incucyte^? 檢測(cè)CYT-303細(xì)胞對(duì)腫瘤球的殺傷，發(fā)現(xiàn)其能增強(qiáng)NK細(xì)胞的殺傷能力

圖6. ?Incucyte^??活細(xì)胞成像系統(tǒng)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)CYT-303能幫助NK細(xì)胞持續(xù)殺傷腫瘤細(xì)胞，而不衰竭

案例2

MCLA-129是基于Merus公司構(gòu)建的一款針對(duì)表皮生長(zhǎng)因子受體（EGFR）和細(xì)胞間質(zhì)上皮轉(zhuǎn)化因子（c-Met）雙特異性抗體。該公司的Biclonics技術(shù)平臺(tái)可以獲得擁有Fc改造形成的異源二聚體，抗體Fc區(qū)去海藻糖基化修飾從而增強(qiáng)ADCC、ADCP效應(yīng)。目前國(guó)內(nèi)外臨床試驗(yàn)均已獲批（CXSL2300322和NCT04868877），Incucyte^? 主要用于ADCP檢測(cè)^[5]。

圖7. Incucyte^? 檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，MCLA-129的ADCP效應(yīng)明顯

小分子藥物

案例1

PRT3789是針對(duì)SMARCA2的降解劑，由Prelude公司開(kāi)發(fā)，目前已經(jīng)進(jìn)入針對(duì)SMARCA4突變的非小細(xì)胞肺癌的I期臨床試驗(yàn)^[6]。

圖8. Incucyte^? 顯示：PRT3789可以選擇性抑制SMARCA4突變的HT1080細(xì)胞生長(zhǎng)

案例2

羅氏公司開(kāi)發(fā)的RG7112是首個(gè)進(jìn)入臨床試驗(yàn)的MDM2抑制劑，目前正在進(jìn)行多項(xiàng)不同的臨床試驗(yàn)，用于治療骨肉瘤、慢/急性粒細(xì)胞性白血病、真性紅細(xì)胞增多癥或原發(fā)性血小板增多癥^[7]。

圖9. Incucyte^? 顯示：RG7112可以抑制SJSA1(骨肉瘤細(xì)胞)生長(zhǎng)

案例3

XL092 是Exelixis公司下一代口服酪氨酸激酶抑制劑（第一代是著名藥物卡博替尼），其靶向 VEGF 受體、MET、AXL和其他與癌癥生長(zhǎng)擴(kuò)散相關(guān)的激酶，在卡博替尼的基礎(chǔ)上，改善了一些包括臨床半衰期等關(guān)鍵特性。Incucyte^? 結(jié)果發(fā)現(xiàn)，該藥物能夠抑制巨噬細(xì)胞的胞葬作用^[8]。

圖10. pH依賴(lài)熒光染料標(biāo)記靶細(xì)胞，10X鏡拍攝6個(gè)小時(shí)，計(jì)算6個(gè)小時(shí)內(nèi)紅色熒光響應(yīng)值的AUC；通過(guò)濃度與AUC曲線(xiàn)計(jì)算IC50

為什么如此多藥物臨床前研究都用到 Incucyte^? 實(shí)時(shí)活細(xì)胞成像系統(tǒng)呢？

• 培養(yǎng)箱內(nèi)可長(zhǎng)達(dá)數(shù)周的連續(xù)觀察，最短幾分鐘間隔拍攝，減少人力，防止過(guò)多操作對(duì)細(xì)胞的傷害
• 6個(gè)板位，分別獨(dú)立設(shè)置檢測(cè)程序，可以兼容各種孔板和培養(yǎng)皿，通量高
• 高效簡(jiǎn)便的模塊化軟件設(shè)置和數(shù)據(jù)分析，輸出圖片、視頻、生長(zhǎng)曲線(xiàn)等多指標(biāo)多參數(shù)
• 大于100種優(yōu)化過(guò)的活細(xì)胞專(zhuān)用熒光試劑、耗材及詳盡的Protocol；文章數(shù)大于13,000篇，是長(zhǎng)時(shí)程活細(xì)胞成像的主流產(chǎn)品

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-參考文獻(xiàn)-

[1] Preclinical Activity of SAR408701: A Novel Anti-CEACAM5–maytansinoid Antibody–drug Conjugate for the Treatment of CEACAM5-positive Epithelial Tumors. Clin Cancer Res 2020;26:6589–99

[2] Preclinical Profile of BYON3521 Predicts an Effective and Safe MET Antibody–Drug Conjugate. Mol Cancer Ther; 22(6) June 2023

[3] Preclinical Development of MGC018, a Duocarmycin-based Antibody–drug Conjugate Targeting B7-H3 for Solid Cancer.

[4] Derivation and Preclinical Characterization of CYT-303, a Novel NKp46-NK Cell Engager Targeting GPC3. Cells 2023, 12, 996

[5] Preclinical evaluation of MCLA-129, a bispecific antibody targeting EGFR and c-MET on solid tumor cells, in comparison with amivantamab. Cancer Research, 2023?

[6] Preclinical characterization of PRT3789, a potent and selective SMARCA2 targeted degrader. Cancer Research, 2022

[7] MDM2 Small-Molecule Antagonist RG7112 Activates p53 Signaling and Regresses Human Tumors in Preclinical Cancer Models. Cancer Res; 73(8) April 15, 2013

[8] Preclinical Characterization of XL092, a Novel Receptor Tyrosine Kinase Inhibitor of MET, VEGFR2, AXL, and MER. Mol Cancer Ther 2023;22:179–91