采用無支架模型對實(shí)體瘤進(jìn)行建模
腫瘤球或腫瘤細(xì)胞聚集體比單層細(xì)胞更能代表在體內(nèi)條件下，生長為腫瘤球的腫瘤細(xì)胞會表現(xiàn)出一些生理特征，包括相關(guān)的形態(tài)、更高的細(xì)胞存活率以及缺氧核心。
越來越多證據(jù)表明，與 2D 單層細(xì)胞模型相比，腫瘤球模型可進(jìn)行更相關(guān)和更多的轉(zhuǎn)化性觀察，特別是在癌癥生物學(xué)和肝毒性領(lǐng)域。盡管研究證實(shí) 3D 腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)能夠比簡單的 2D 單層細(xì)胞更接近于癌癥的生理環(huán)境，但目前可用的大多數(shù) 3D 腫瘤球形成和定量技術(shù)通常費(fèi)時費(fèi)力、價格高昂和/或可重現(xiàn)性較低。 在圓底 ULA 板中制備單腫瘤球模型是一種簡單經(jīng)濟(jì)的實(shí)體瘤模型建立方式。
應(yīng)用
Incucyte? 3D 單腫瘤球分析
要有效分析基于液體的 3D 單腫瘤球可能頗具挑戰(zhàn)。傳統(tǒng)的酶標(biāo)儀分析缺少基于圖像的多方面分析，包括分析形態(tài)信息和確認(rèn)圖像中數(shù)據(jù)的功能。由于多種因素，傳統(tǒng)的成像系統(tǒng)本身就難以適應(yīng)體外培養(yǎng)模型的動力學(xué)分析，主要原因如下：
- 數(shù)據(jù)不完整 -成像間隔之間的信息缺失
- 多種不受控制的環(huán)境波動 -細(xì)胞在培養(yǎng)箱和成像系統(tǒng)之間來回轉(zhuǎn)移，同時培養(yǎng)箱外冗長的 3D 圖像采集方案會造成溫度差異，且無法控制氧氣和二氧化碳濃度
- 理想的圖像采集參數(shù)開發(fā)非常耗時
- 圖像處理復(fù)雜，需要專家級操作人員生成定量信息
Incucyte? 3D 單腫瘤球分析方案可提供集成式的完整解決方案，在組織培養(yǎng)箱內(nèi)實(shí)時自動追蹤和定量腫瘤球的形成、生長和健康狀態(tài)。
視頻：利用 Incucyte? 活細(xì)胞分析系統(tǒng)和 Incucyte? Cytotox 綠色染料持續(xù)監(jiān)測腫瘤球的生長和細(xì)胞毒性。將無標(biāo)記 SK-OV-3 人卵巢腺癌細(xì)胞（使用或不使用 1μM 喜樹堿處理）進(jìn)行 10 天的明場和綠色熒光成像。
關(guān)鍵優(yōu)勢
Incucyte? 3D 單腫瘤球分析的關(guān)鍵優(yōu)勢
- 獲得更多生理相關(guān)信息?- 在培養(yǎng)箱中定量無標(biāo)記生長，研究 3D 腫瘤球培養(yǎng)物的形態(tài)。
- 揭示單一培養(yǎng)或共培養(yǎng)中細(xì)胞隨時間的變化?-?使用無干擾型試劑實(shí)時測定細(xì)胞活力和毒性，研究作用機(jī)制或免疫調(diào)節(jié)
- 生成可重現(xiàn)的定量數(shù)據(jù)?-?通過經(jīng)實(shí)驗(yàn)室測試的方案、高質(zhì)量圖像和客觀分析獲得適用于藥理學(xué)分析的可靠數(shù)據(jù)
- 提高分析效率?-?可同時自動采集、分析和繪制多達(dá)六個 96/384 孔板的數(shù)千張圖像，更快地獲得結(jié)果
獲得更多生理相關(guān)信息
圖 1. 監(jiān)測腫瘤球大小隨時間的變化，監(jiān)測時，腫瘤球的生長在組織培養(yǎng)箱內(nèi)不受干擾。
明場圖像顯示了 MDA-MB-231 乳腺癌腫瘤球 ± 細(xì)胞毒素劑喜樹堿 (1 μM) 的生長情況。 經(jīng)溶媒處理的腫瘤球體積增加，而經(jīng) CMP 處理的腫瘤球保持原有的密度。 每 6 h 自動采集一次圖像，用于明場區(qū)域的定量分析。
圖 2. 高質(zhì)量 HD 相位圖和 DF 明場圖像顯示腫瘤球形態(tài)。A549 和 MDA-MB-231 細(xì)胞接種后 72 小時形成的腫瘤球高質(zhì)量 HD 相位圖和對應(yīng)的 DF 明場圖像。從圖中可輕松地區(qū)分疏松的聚集體和致密的腫瘤球形態(tài)，如圖中 A549 和 MDA-MB-231 細(xì)胞所示例。MDA-MB-231 聚集物在離心后加入 2.5% v/v Matrigel?，可密集化形成腫瘤球。所有圖像經(jīng) 10 倍放大后采集。
揭示單一培養(yǎng)或共培養(yǎng)中細(xì)胞隨時間的變化
圖 3.確定細(xì)胞毒性和細(xì)胞抑制的作用機(jī)制。 利用 Incucyte? Cytotox 綠色染料比較明場和熒光讀數(shù)。圖像中顯示了處理 10 天后，SK-OV-3 腫瘤球明場 mask 區(qū)域中的綠色熒光。 明場區(qū)域的時程曲線顯示了兩種藥物處理后類似的響應(yīng) - 隨著藥物濃度的增加，腫瘤球的生長受到抑制。 明場邊界內(nèi)的平均綠色強(qiáng)度（底部行）顯示了腫瘤球?qū)?xì)胞毒性（喜樹堿，左）和細(xì)胞抑制性（環(huán)己酰亞胺）試劑的響應(yīng)差異。 在喜樹堿存在的情況下，細(xì)胞死亡，導(dǎo)致細(xì)胞毒性報(bào)告試劑（Incucyte? Cytotox 綠色染料）產(chǎn)生的熒光強(qiáng)度增加；而經(jīng)環(huán)己酰亞胺和溶媒處理的腫瘤球只顯示出少量細(xì)胞死亡，與預(yù)期一致。
圖 4. 在 Incucyte? 活細(xì)胞分析系統(tǒng)中持續(xù)監(jiān)測腫瘤球的生長和細(xì)胞健康狀態(tài)。SK-OV-3 人卵巢癌細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)核限制性熒光蛋白（Incucyte? Nuclight 紅色慢病毒試劑）。細(xì)胞毒性藥物喜樹堿 (1 μM) 抑制了熒光隨時間的增加（在明場 mask 定義的腫瘤球區(qū)域內(nèi)測定）。
圖 5.（視頻）.在 3D 細(xì)胞培養(yǎng)模型中定量分析抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性 (ADCC)。在腫瘤球模型中，曲妥珠單抗（Herceptin?，赫賽汀?）誘導(dǎo) SK-OV-3 卵巢癌細(xì)胞的免疫細(xì)胞殺傷。將帶有 Incucyte? Nuclight 紅色標(biāo)記的 HER2 陽性 SKOV-3 腫瘤球與 PBMC 共同接種，并使用赫賽汀（靶向 HER2 受體的 mAb）處理。赫賽汀可誘導(dǎo) SKOV-3 腫瘤球的生長抑制。
生成可重現(xiàn)的定量數(shù)據(jù)
圖 6.經(jīng)實(shí)驗(yàn)室測試和驗(yàn)證的 Incucyte? 腫瘤球方案清晰易懂。減少 3D 細(xì)胞培養(yǎng)中解決難題的時間，無需反復(fù)實(shí)驗(yàn)即可獲得適合定量分析的圖像。
圖 7. 腫瘤球培養(yǎng)顯示出分析的穩(wěn)定性和可重現(xiàn)性。Incucyte? VesselView 展示了 4 個細(xì)胞密度下 3 種腫瘤球類型（肺癌、纖維肉瘤、卵巢癌）的明場區(qū)域 mask。明場區(qū)域圖顯示，這些細(xì)胞類型以建議的密度（2500 個細(xì)胞/孔）接種可產(chǎn)生穩(wěn)定的時程曲線。
圖 8.在生理相關(guān)條件下進(jìn)行穩(wěn)定的藥理學(xué)分析。在組織培養(yǎng)箱中進(jìn)行無標(biāo)記腫瘤球分析，檢測喜樹堿 (CMP)、順鉑 (CIS) 和奧沙利鉑 (OXA) 對 SKOV-3 細(xì)胞生長的影響。SKOV-3 細(xì)胞以 5000 個細(xì)胞/孔的密度接種，等待腫瘤球形成（72 小時），然后采用一系列稀釋的化合物處理細(xì)胞，獲得腫瘤球生長的動力學(xué)參數(shù)。微孔板圖表展示了單個孔隨時間的最大明場 (BF) 面積 (μm2)。濃度響應(yīng)曲線顯示了處理 240小時后的最大 BF 面積 (μm2)。數(shù)據(jù)收集時間為 240 小時，每間隔 6 小時采集一次圖像。每個數(shù)據(jù)點(diǎn)代表平均值 ± SEM，n = 8。
提高分析效率
圖 9. 向?qū)浇缑妫词钩醮问褂玫挠脩粢材軌蜉p松操作。 自動圖像采集和分析工具可為您帶來“輕松設(shè)置，自動化處理”的體驗(yàn)。支持遠(yuǎn)程查看圖像，監(jiān)測實(shí)驗(yàn)進(jìn)程，實(shí)時分析，快速作出決策。
訂購信息
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產(chǎn)品 | 數(shù)量 | 產(chǎn)品目錄號 |
|---|---|---|
Incucyte? 腫瘤球分析軟件模塊 | 1 | 9600-0019 |
Incucyte? Cytotox 綠色染料 | 1 | 4633 |
Incucyte? Cytotox 紅色染料 | 1 | 4632 |
Incucyte? Annexin V 紅色染料 | 1 | 4641 |
Incucyte? Annexin V 綠色染料 | 1 | 4642 |
Incucyte? Nuclight 綠色慢病毒試劑（EF-1a 啟動子、Puro 篩選） | 1 | 4624 |
Incucyte? Nuclight 紅色慢病毒試劑（EF-1a 啟動子，Puro 篩選） | 1 | 4625 |
Incucyte? Cytolight 綠色慢病毒試劑（EF-1a 啟動子、Puro 篩選） | 1 | 4481 |
Incucyte? Cytolight 紅色慢病毒試劑（EF-1a 啟動子，Puro 篩選）? | 1 | 4482 |
