細胞吞噬作用和胞葬作用
巨噬細胞等吞噬免疫細胞的關(guān)鍵功能是對患病或瀕死細胞的吞噬作用。通過吞噬作用清除死亡細胞或凋亡細胞，稱之為胞葬作用。胞葬作用對于解決炎癥發(fā)作（例如去除炎癥后持續(xù)存在的中性粒細胞）和預(yù)防慢性炎癥或自身免疫性疾?。ɡ?COPD、哮喘、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、纖維化和動脈粥樣硬化）至關(guān)重要。胞葬作用也是在抗癌藥物治療后有效去除凋亡腫瘤細胞的關(guān)鍵，可確保細胞內(nèi)容物被包裹并避免不必要的炎癥反應(yīng)。
癌細胞不需要死亡就能被吞噬細胞清除。通過可與吞噬細胞結(jié)合的藥物標記細胞的方法，藥物可以靶向腫瘤細胞，促進吞噬細胞的攝取和清除。利妥昔單抗（一種靶向 B 細胞的抗 CD20 單克隆抗體）等抗體的添加可以觸發(fā)抗體依賴性細胞吞噬作用 (ADCP)。另一種類似的策略是使用抗體來阻斷“don’t eat me”（別吃我）信號（腫瘤細胞利用該機制逃避清除，例如 CD47）的表達。抗 CD47 抗體可阻斷該信號，使吞噬細胞能夠識別并清除癌細胞。
應(yīng)用
Incucyte? 細胞吞噬作用分析簡介
Incucyte? 活細胞分析系統(tǒng)可在細胞培養(yǎng)箱內(nèi)進行實時自動化的細胞吞噬作用和胞葬作用分析。
在整個分析過程中對細胞的吞噬作用進行自動定量分析。選擇使用配備有效 pH 敏感性探針（用于細胞吞噬作用的 Incucyte? pHrodo? 紅色細胞標記試劑）標記的靶細胞，實時測定細胞吞噬。使用 Incucyte? 高清相位對比圖像確定吞噬信號，直接觀察細胞吞噬情況。
非常適用于：
- 篩選可抑制/活化胞葬作用的化合物
- 定量分析抗體介導(dǎo)的細胞吞噬作用（例如，抗 CD47 抗體介導(dǎo)的吞噬作用或 ADCP）
視頻：使用 Incucyte? 活細胞分析系統(tǒng)實時監(jiān)測凋亡細胞的吞噬作用。采用 Incucyte? 系統(tǒng)獲取的延時視頻實時顯示了 J774A.1 型小鼠巨噬細胞吞噬帶有 Incucyte? pHrodo? 紅色標記的凋亡 Jurkat T 淋巴細胞。凋亡 Jurkat 細胞在被吞噬并進入吞噬體的酸性環(huán)境中后，熒光增加。Incucyte? 集成圖像分析工具能夠在整個分析過程中分析和測定紅色熒光信號。
檢測原理
將巨噬細胞（例如 J774A.1 小鼠巨噬細胞）或其他吞噬細胞接種到 96 或 384 孔板中。
通過用于細胞吞噬作用的 Incucyte? pHrodo? 紅色細胞標記試劑盒標記凋亡的靶細胞（例如中性粒細胞、Jurkats），然后將靶細胞添加至微孔板并實時測定吞噬細胞攝取靶細胞的情況
細胞熒光增加表明靶細胞已內(nèi)化至吞噬體中。Incucyte? 自動圖像分析可實現(xiàn)細胞吞噬作用隨時間變化的定量分析。
關(guān)鍵優(yōu)勢
Key Advantages
- 采用延時成像觀察和定量細胞的吞噬作用
- 采用延時成像觀察和定量細胞的吞噬作用
- 簡單的即混即讀 96/384 孔板方案，無需細胞清洗、固定和分離操作
- 以靈活的檢測方式進行相關(guān)測定
- Incucyte? pHrodo? 紅色細胞標記試劑盒可兼容您選定的吞噬細胞/靶細胞
采用延時成像觀察和定量吞噬作用
- 直觀的 Incucyte? 圖像分析工具可實時觀察和檢測吞噬作用。利用圖像和視頻驗證處理效果
- pHrodo 熒光信號僅在靶細胞已內(nèi)化時才會出現(xiàn)，消除了虛假信號的風(fēng)險
圖 1. 使用圖像和視頻觀察并驗證細胞的吞噬作用（胞葬作用）。 ?延時圖像顯示，J774A.1 小鼠巨噬細胞在 24 小時內(nèi)吞噬了 Incucyte? pHrodo? 紅色細胞標記試劑盒標記的凋亡 Jurkats 細胞。熒光信號與吞噬作用相關(guān)的表型變化建立了關(guān)聯(lián)。我們使用 Incucyte? 圖像分析工具定量分析胞葬作用，該軟件方便易用，可針對被吞噬的凋亡細胞直接進行基于圖像的檢測（藍色 mask）。
在整個時間進程中進行自動分析
在無需將細胞從培養(yǎng)箱的穩(wěn)定環(huán)境中取出的前提下，確定處理效果如何及何時發(fā)生。
圖 2.自動、非侵入性地定量處理效果。96/384 孔板中每個孔的自動成像和分析，提供胞葬作用隨時間變化的微孔板讀數(shù)（左圖）。時間進程圖顯示處理效果呈濃度依賴性（中間圖）。將數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)化為濃度響應(yīng)曲線，比較藥理學(xué)結(jié)果（右圖）。
簡單的 96/384 孔板方案，無需細胞清洗、固定和分離操作
圖 3. 快速指南。1) 在 96 孔板中接種吞噬細胞（例如 J774A.1，1-10 K/孔）。培養(yǎng)過夜（50 μL/孔）。2) 在吞噬作用前，用化合物處理效應(yīng)細胞（0.5-24 小時預(yù)處理，25 μL/孔）。3) 將 Incucyte? pHrodo 標記的靶細胞加入預(yù)處理過的孔中（10 μL/孔，25 μL/孔）。4) 在 Incucyte? 系統(tǒng)中，每 10-20 分鐘（20× 或 10×）采集圖像，持續(xù) 2-18 小時。使用集成軟件進行分析。
以靈活的檢測方式進行相關(guān)測定
- 使用選定的吞噬細胞和靶細胞檢測對患病、死亡或瀕死細胞的吞噬作用。研究抗體介導(dǎo)的細胞吞噬作用（例如，抗 CD47 抗體介導(dǎo)的吞噬作用/ADCP）或胞葬作用（對凋亡細胞的吞噬作用）。
圖 2. 靈活選擇靶細胞和效應(yīng)細胞。使用 Incucyte? pHrodo? 紅色細胞標記試劑盒標記活性 T 淋巴母細胞 CCRF-CEM，然后將其暴露于抗 CD47 單克隆抗體或 IgG 同型對照中。抗 CD47 抗體與 CCRF-CEM 細胞上的“don’t eat me”（別吃我）信號相結(jié)合，促進巨噬細胞介導(dǎo)的吞噬作用。在抗 CD47 抗體存在的情況下，靶細胞被來源于骨髓的巨噬細胞吞噬，使熒光信號增加并呈現(xiàn)出濃度依賴性效應(yīng)。同型對照 IgG 在所有測試濃度下均對吞噬作用沒有影響。
常見問題解答
細胞吞噬作用常見問題解答
比較不同巨噬細胞系的吞噬能力需要穩(wěn)定和可重現(xiàn)的培養(yǎng)條件，和對吞噬活動的頻繁監(jiān)測。吞噬作用競爭實驗可作為很好的起始方法，該實驗使用經(jīng)過 pH 敏感性染料處理的引誘物或靶細胞，定期比較包含熒光的吞噬體數(shù)量?；罴毎治銎脚_可在不干擾培養(yǎng)系統(tǒng)的情況下進行定期成像，能為需要頻繁監(jiān)測和成像的分析帶來優(yōu)勢。
胞葬作用是描述死亡或凋亡細胞吞噬作用的術(shù)語，區(qū)別于活細胞、細胞碎片或其他碎片的吞噬作用。因此，吞噬作用分析可以檢測中性粒細胞和任何其他吞噬細胞類型中的胞葬作用。
與任何基于活體生物的分析一樣，我們無法控制每個影響因素，但通過在培養(yǎng)箱內(nèi)的活細胞分析方法實現(xiàn)吞噬作用分析的標準化，可以幫助您消除差異的主要來源 - 節(jié)省微孔板在培養(yǎng)箱外成像的大量時間?；罴毎治隹蓪奘杉毎耐淌勺饔眠M行定期和全面的分析，無需手動操作。
一般來說，吞噬作用的速度和效率與被吞噬目標的大小和形狀相關(guān)，活動的吞噬細胞會試圖吞噬途中的任何物質(zhì)。除非靶細胞異常大或形狀異常，否則在為吞噬作用分析選擇靶細胞時，細胞的大小或形狀沒有實際限制。
如果吞噬作用分析完全建立在目視觀察上，則該分析適用于溶酶體不足的巨噬細胞的吞噬作用研究。然而，由于大多數(shù)其他吞噬作用分析依賴于吞噬體與內(nèi)體腔融合后發(fā)生 pH 變化導(dǎo)致的顏色變化，因此溶酶體不足的巨噬細胞可能無法提供有意義的數(shù)據(jù)。在這種情況下，應(yīng)通過實驗確定用于巨噬細胞吞噬作用的 pH 敏感性指示劑的值。
訂購信息
訂購信息
產(chǎn)品 | 產(chǎn)品數(shù)據(jù)表 | 數(shù)量 | 產(chǎn)品目錄號 |
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用于吞噬作用的 Incucyte? pHrodo? 紅色細胞標記試劑盒 | 1 盒 | 4649 |
