Incucyte^? 線粒體膜電位分析

線粒體膜電位（MMP 或 ΔΨm）是在電子傳遞鏈合成 ATP 時，維持合成所需氫離子電化學(xué)勢的基本組成部分，并已證明是維持線粒體健康的重要因素。在正常生理活動下，MMP 保持相對穩(wěn)定。然而，長期的干擾會對細胞健康和活力產(chǎn)生不利影響，導(dǎo)致各種病理生理問題。MMP 的監(jiān)測可提供早期線粒體完整性的靈敏指標(biāo)，對于識別與糖尿病、癌癥和神經(jīng)退行性疾病等病理性疾病相關(guān)的線粒體功能障礙非常關(guān)鍵。

評估 MMP 的常用分析通常依賴于間接的串聯(lián)終點測定，難以通過形態(tài)變化進行驗證。Incucyte^? 線粒體膜電位分析方案能夠?qū)崟r檢測活細胞中 MMP 的瞬時和長期變化，并可以與細胞標(biāo)記、細胞凋亡或細胞毒性試劑聯(lián)合使用，進一步評估細胞健康。持續(xù)追蹤 MMP 變化，揭示細胞穩(wěn)態(tài)和疾病的復(fù)雜性。

應(yīng)用

Incucyte^? 線粒體膜電位分析簡介

Incucyte^? 線粒體膜電位分析可提供一種綜合性解決方案，支持在細胞培養(yǎng)箱內(nèi)實時自動觀察和定量分析 MMP 變化。與 TMRE 和 TMRM 分析類似，Incucyte^? MMP 橙色試劑可滲透細胞，并在活性線粒體中累積，與線粒體膜電化學(xué)梯度產(chǎn)生的 ΔΨm 成比例。 ?MMP 下降表示線粒體的功能和/或完整性受到干擾，也可將其用作細胞凋亡的早期指標(biāo)。

該分析試劑盒使用兩種對照化合物：FCCP，一種解偶聯(lián)劑，可轉(zhuǎn)運 H+ 離子穿過線粒體膜并使線粒體膜去極化（表現(xiàn)為熒光減少）；寡霉素 A，一種 ATP 合酶抑制劑，可導(dǎo)致膜超極化（表現(xiàn)為熒光增加）。

關(guān)鍵優(yōu)勢

評估線粒體壓力?-使用便捷的即混即讀方案對線粒體壓力進行動力學(xué)測定
檢測活細胞中 MMP 的變化?-?自動生成定量且可重現(xiàn)的活細胞中 MMP 的測定數(shù)據(jù) - 全部分析在細胞培養(yǎng)箱內(nèi)完成
監(jiān)測細胞形態(tài)變化并結(jié)合細胞健康試劑進行多重分析?-?可觀察細胞形態(tài)隨時間的變化，結(jié)合細胞凋亡或細胞毒性讀數(shù)，評估與代謝變化相關(guān)的細胞健康變化

評估線粒體壓力

利用 Incucyte^? MMP 橙色試劑盒，通過便捷的即混即讀方案快速可視化和定量分析 MMP 的變化。

檢測活細胞中 MMP 的變化

自動生成定量且可重現(xiàn)的活細胞中 MMP 的測定數(shù)據(jù)。通過檢測熒光強度隨時間的變化定量分析 MMP 變化。

圖 1. 線粒體膜電位的動力學(xué)監(jiān)測。在 Incucyte^? MMP 橙色染料存在的情況下，使用溶媒、喜樹堿、FCCP 或寡霉素處理 HeLa 細胞，然后監(jiān)測（隨時間變化）化合物對線粒體膜電位的影響 (A)。對照孔和藥物處理孔的平均熒光強度線性圖突出顯示了化合物誘導(dǎo) 0 小時和 40 小時的線粒體極化變化 (B)。使用 Incucyte^? Cell-by-Cell 分析軟件進行無標(biāo)記細胞計數(shù) (C)。溶媒、FCCP、寡霉素（6 小時）、喜樹堿處理（40 小時）獲得的高清相位/熒光圖像 (D)。

監(jiān)測細胞形態(tài)變化并結(jié)合細胞健康試劑進行多重分析

Incucyte^? MMP 橙色試劑盒可與 Incucyte^? Caspase 3/7、Annexin V 或 Cytotox 染料聯(lián)合用于定量細胞凋亡或細胞毒性，以及觀察細胞形態(tài)隨時間的變化。

圖 2. 結(jié)合細胞健康讀數(shù)的多重線粒體膜電位測定。在 Incucyte^? MMP 橙色試劑和 Cytotox NIR 染料存在的情況下，使用蛋白激酶抑制劑十字孢堿 (SSP) 處理 HeLa 細胞，然后聯(lián)合評估化合物的細胞毒性及其對線粒體膜電位的影響 (A)。(B) 圖中顯示了 MMP 和 Cytotox NIR 檢測的濃度相應(yīng)曲線（24 小時數(shù)據(jù)）。(C) 圖中顯示了對照孔、0.3 μM SSP 處理孔和 3 μM SSP 處理孔的代表性高清相位 + 熒光圖像（在 24 小時的時間點）。